Рупа Гангули родилась 25 ноября 1966 года в Калькутте, Индия. Она выросла в большой семье и получила степень бакалавра в Колледже Джогамайя Деви, входящем в Калькуттский университет. Ее актерский дебют состоялся в хинди-телефильме Биджоя Чаттерджи Nirupama в 1986 году, основанном на бенгальском рассказе Рабиндраната Тагора. Прорывной для нее стала роль в бенгальском телесериале Muktabandha в том же году. Национальное признание она получила благодаря хинди-телесериалу Ganadevta, а затем достигла широкой известности и популярности, сыграв Драупади в эпическом телесериале Махабхарата, который транслировался с 1988 по 1990 год.

В кинокарьере Рупа Гангули работала с такими известными режиссерами, как Мринал Сен, Апарна Сен, Гаутам Гхош и Ритупарно Гхош. Среди ее значимых работ в фильмах — Ek Din Achanak (1989), Kamla Ki Maut (1989), Padma Nadir Majhi (1992), Antarmahal (2005) и Barfi! (2012). Она получила Национальную кинопремию за лучшую женскую закадровую певицу за исполнение песни в бенгальском фильме Адити Роя Abosheshey (2012), где она также исполнила роль Сучисмиты.

В 2016 году Рупа Гангули была номинирована президентом Индии в качестве члена парламента Раджья Сабхи, верхней палаты индийского парламента. Она также занимала пост президента Женского крыла Бхаратия Джаната Парти в Западной Бенгалии. Ее фильмография охватывает как бенгальское, так и хинди-кино, демонстрируя ее многогранность как актрисы.